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实验四 霉菌的个体形态观察
一、目的要求
掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。
二、基本原理
霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是（a）细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；（c）溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。霉菌的菌丝、分生孢子梗和分生孢子的形态常作为分类的重要依据。
三、器材
曲霉（Aspergillus sp.），青霉 (Penicillium sp.)，根霉(Rhizopus sp.)，毛霉(Mucor sp.)；
乳酸石炭酸棉蓝染色液，20%甘油，马丁氏（Martin）培养基平板或查氏培养基平板，无菌吸管，载玻片，盖玻片，U形棒，解剖刀，玻璃纸，滤纸等。
四、操作步骤
1．一般观察法
（1）将培养3—4天的霉菌培养皿打开，放在显微镜低倍镜下寻找菌落的边缘，直接观察菌丝，分生孢子梗和分生孢子。
（2）于洁净载玻片上，滴一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘外取少量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。
2．载玻片观察法
（1）将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上U形玻棒，其上放一洁净的载玻片，然后将二个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1.05㎏/㎝2，121.3℃灭菌20分钟，备用。
（2）将6—7ml灭菌的马丁氏（Martin）琼脂培养基倒入直径为9㎝的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成0.5—1㎝2的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2块。
（3）用灭菌的尖细接种针，取（肉眼方能看见的）一点霉菌孢子，轻轻点在琼脂块的边缘上，用无菌镊子夹着立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，再盖上皿盖。
（4）在培养皿的滤纸上，加无菌的20%甘油数毫升，至滤纸湿润即可停加，将培养皿置28℃培养一定时间后，取出载玻片置显微镜下观察。
3.玻璃纸透析培养观察法
（1）向霉菌斜面试管中加入5ml无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。
（2）用无菌镊子将已灭菌的、直径与培养皿相同的圆形玻璃纸覆盖于查氏培养基平板上。
（3）用1ml无菌吸管吸取0.2ml孢子悬液于上述玻璃纸平板上，并用无菌玻璃刮棒涂抹均匀。
（4）置于28℃温室培养48小时后，取出培养皿，打开皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀取一小片玻璃纸置载玻片上，用显微镜观察。
五、实验报告
1.绘图说明你所观察到的霉菌形态特征。
2.霉菌对人类生活和生产能产生哪些积极作用和消极作用？
3.玻璃纸应怎样进行灭菌？为什么？
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