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高三 生 物 教材中有一个学习细菌培养的基本技
术的实验，按照教学参考书的设计要花3个课时的时
间，而且仅仅进行了细菌的培养过程，这样有点浪费
时间，对学生而言实际学到的知识又不够多。本人在
教学中经过多轮的不同设计和摸索，发现做一些步骤
上的改进，可以让学生学得更多并且节约时间。因为
现在一般学校的规模比较大，如果通过平等班之间实
验步骤的穿插进行，即可以节约时间，又不耽误了解
实验的全过程。因此我把实验分成2个部分来完成。
1 实验课前2周，由课外兴趣小组同学完成大肠杆
菌的分离提纯
课本 中是 用牛肉膏蛋白陈培养基培养金黄色葡
萄球菌。但让学生学习鉴别和分离纯化微生物及取材
的方便考虑，我们改用培养大肠杆菌。这一改进不仅
可以使省事能熟悉并理解鉴别培养基，还能认识并观
察大肠杆菌在伊红和美蓝培养基上形成的深紫色并
带有金属光泽的菌落。分离方法采用平板稀释分离
法，即先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒人平板
上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌
液均匀分布，就可长出单个微生物的菌落。实验分以
下步骤依次进行。
1.1 倒平板
照教 科 书 上的配方配制伊红和美蓝培养基，灭菌
后倒人无菌的培养皿中，置实验台上凝固成平板。
1.2 制备污水稀释液
从学 校 门 前的河里取一定量的污水作分离菌液。
将待分离菌液进行梯度稀释。先取10 mL水样加人到
90 mL水中，在三角瓶中振摇20 min后，制成第一份
污水稀释液。取上述水样0.5 mL加人盛有4.5 mL水
的试管中，制成第二份稀释液。以此类推，制成不同稀
释度的污水稀释液。试管上注明稀释度。
1.3 涂布并培养
用 一 支 无菌的吸管，依次取一定体积的稀释菌
液，将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。然后
用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表
面上，每个稀释度重复做3个培养皿。待放于37℃的
恒温箱中保温培养24 h后，在平板上出现的菌落中
选择深紫色并带有金属光泽的菌落，即大肠杆菌的单
克隆(该培养皿留着以后学生分组实验时观察用)。
1.4 检查菌落是否单纯
选 择在 培 养基上长出的单个大肠杆菌菌落，用无
菌操作法将菌体挑出，接种到灭菌的斜面培养基上培
养，即得纯培养的菌落。如果不纯时，再重复进行一
次。
1.5 扩大培养
准 备 60 支灭菌过的含大肠杆菌培养基的试管，
把菌种移到试管中。培养后当做学生实验的菌种试
管。同时制备60支没有接种过的仅含大肠杆菌培养
基的空白试管给第一个班的学生用。这2类试管中的
培养基只需要一般的大肠杆菌培养基，不需要加伊红
和美蓝了。以后的学生实验用的也同样不需要加伊红
和美蓝。
2 学生分组实验完成细菌培养过程
照课 本 中 的要求，本实验是通过以下5个步骤来
完成的。它们分别是培养基的配制(称量、溶化、调
pH、培养基的分装、加棉塞、包扎)、灭菌、搁置斜面、
接种、培养。但是其中培养基的灭菌、细菌的培养都必
须耗费一定的时间才能完成，因此实验必须分3次
做。分组实验中，我通过对实验步骤的调整，使平行班
之间实验步骤穿插进行，可以在一节课内完成。
教 师在 学 生实验前1h左右把兴趣小组同学准
备的仅含大肠杆菌培养基的空白试管进行灭菌。灭菌
完成后就在灭菌锅里放着。将兴趣班同学做的分离大
肠杆菌的伊红和美蓝培养基置于实验室中让同学观
察，一是观察菌落的形态;一是观察形成的深紫色并
带有金属光泽的大肠杆菌菌落。
第 一个 班 的同学在实验课中先完成培养基的配
制、灭菌2个步骤。在进行灭菌的同时，教师指导他们
打开教师已完成灭菌的锅，取出其中的试管先进行斜
面的搁置。然后进行接种的操作学习。接着就可以进
行培养。至于培养后的观察，可以让他们先观察兴趣
小组同学做的菌种试管就行。而灭菌锅内的试管留给
下一个班级同学操作。
第二 个 班 的同学到实验室后，进行的步骤大致同
于第一个班的同学一样。不同的是培养后的观察，可
以用前一天其他班级同学培养后的试管来观察了，并
且在观察后处理培养基并清洁试管。其他班同学依次
进行。
第 一 个 班的同学在最后一个班级实验完成后的
第二天，再利用课外时间回实验室对最后一个班级培
养的细菌进行观察后，处理培养基并清洁试管。
通过 这 样 安排，全部同学都进行了一次所有操作
步骤，又能在一节课上全部完成。具体根据平行班的
多少及每天进行实验的班级数的多少进行相同原理
的调整。
3 本实验操作过程中的注意事项
使用 高 压 蒸汽灭菌锅灭菌时冷空气要彻底排除，
灭菌锅勿忘加水，灭菌锅压力降为‘`0”时方可打开排
气阀，完全排出水蒸气后再开锅。
建 立 无 菌的观念:如实验中要用到的用具尽量能
灭菌后使用，象培养皿、试管、漏斗、量筒、玻璃棒、滴
管、胶管等，以确保实验的成功。每次使用接种环前
后，均应在火焰上彻底灼烧。但在灼烧后要把接种环
放在培养基边缘处冷却后再取菌种，以免烫死菌种。
空气中的杂菌在气流小的情况下，会随着灰尖落下，
所以接种时，打开试管或培养皿的时间应尽量短。整
个接种过程一定要在火焰旁边进行。在实验台上方，
空气流动应缓慢，其周围杂菌也应越少越好。为此，必
须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空
气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。呼吸不要频
繁，不要讲话，以免空气和口腔中的微生物随气流而
进人试管中。接种环、棉塞一定要拿在手上，不能随便
乱丢。
实验 台 面 不论是什么材料，一律要求光滑、水平。
光滑是便于用消毒剂擦洗;水平是倒琼脂培养基时利
于培养皿内平板的厚度保持一致。
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